Инструменты диагностики буллезного эпидермолиза

Биопсия кожи

Биопсия кожи является первичным методом лабораторной диагностики БЭ. Биоптат кожи можно исследовать различными методами, оптимальным является непрямой иммунофлюоресцентный метод.

Виды биопсии и ее особенности:

1. Световая микроскопия.

Обычная световая микроскопия имеет малую ценность при диагностике наследственных форм БЭ. Данным методом выявляется цитолиз клеток базального слоя, внутриэпидермальные пузыри, однако эти признаки не являются патогномоничными для БЭ. Как таковая, световая микроскопия применяется при дифференциальной диагностике, например, с внутриутробной герпетической инфекцией.

2. Иммунофлюоресцентный метод (антигенное картирование).

Антигенное картирование является методом оценки экспрессии антигенов, главным образом, структурных белков, в срезах ткани посредством иммуногистохимии. Антигенное картирование, используемое вместе со специфичными антителами, позволяет не только установить один из основных типов БЭ, но и структурный белок, наиболее вероятно подвергшийся мутации. Этим методом определяется присутствие, отсутствие или сниженная экспрессия структурных белков кератиноцитов или дермо-эпидермального соединения, а также их распределение в пузыре в коже пациентов с БЭ. Тем самым, может быть определен уровень образования пузырей. Антигенное картирование является столь же диагностически достоверным методом, как и трансмиссионная электронная микроскопия, как минимум для диагностики нескольких подтипов БЭ.

Антигенное картирование служит основным средством немолекулярной диагностики при БЭ, оно может дать быструю информацию о типе БЭ и, таким образом, о прогнозе, исходе и течении заболевания. Кроме того, результаты антигенного картирования дают основания для генетического анализа.

3. Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ).

Много лет ТЭМ была золотым стандартом лабораторного подтверждения БЭ. Она сыграла ключевую роль в создании современной классификации БЭ и открытии новых форм заболевания. ТЭМ по сей день сохраняет ведущее место среди методов точного определения уровня «расслоения» кожи.

В настоящее время, непрямой иммунофлюоресцентный метод практически вытеснил ТЭМ в качестве основного способа диагностики БЭ. Однако ТЭМ имела важное значение в диагностике БЭ. Определенная роль останется за ней, несмотря даже на возрастание лабораторной значимости других методов.

Генетическая диагностика

Молекулярно-генетическое исследование  позволяет выявить мутации, наблюдаемые у пациента с БЭ и является обязательным при определении типа и локализации мутации, а также типа наследования заболевания. В настоящее время генетический анализ является методом, достоверно подтверждающим диагноз.

При БЭ обычно генетический анализ проводят методом прямого секвенирования.

Генетический анализ позволяет провести дородовую диагностику последующего потомства в семье, где есть пациент с БЭ и обследовать беременную женщину на ранних сроках. Однако дородовая диагностика проводится в семье, где уже известен генетический дефект. Для этого необходимо обследовать в первую очередь больного, его родителей, и только после этого возможно проведение пренатальной диагностики.

В случае если ребенок с БЭ умер, то обследуются родители этого ребенка, а затем им проводится дородовая пренатальная диагностика при последующих беременностях.

При использовании вспомогательных репродуктивных технологий (экстракорпоральное оплодотворение) в семьях с БЭ возможно проведение преимплантационной диагностики для некоторых типов БЭ при условии, что мутация ранее установлена.

Также учитывая активно ведущиеся разработки в области потенциального лечения БЭ в различных странах мира, точно установленная и подтвержденная форма БЭ позволит пациентам в будущем принять участие в ряде программ по подбору лечения БЭ.

Как любой метод исследования, ДНК анализ имеет ряд ограничений, в том числе технических.

При исследовании частых мутаций возможно получение «отрицательного» результата анализа. Это значит, что в исследуемом гене могут не обнаружить искомых мутаций, в таком случае необходимо проведение секвенирования выбранного гена.

Некоторые фенотипически идентичные подтипы БЭ могут быть результатом мутаций в разных генах, что приводит к необходимости исследования нескольких генов.

Основные типы БЭ и гены, ответственные за них